Instituto         Hospital Italiano
Cuantificación de fármacos inmunosupresores en sangre seca en papel de filtro precortado por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem
Bressán, Ignacio Guillermo

Disponibilidad: Embargo

 Resumen

Los fármacos inmunosupresores son una diversa familia de compuestos que se utilizan para controlar la respuesta inmunológica en los trasplantes de órganos, algunos tipos de cáncer y enfermedades autoinmunes. En el primer caso el objetivo principal es evitar el rechazo del injerto. Entre los inmunosupresores comúnmente empleados en la práctica clínica se encuentran los inhibidores de la calcineurina (tacrolimus y ciclosporina A) y los inhibidores de la mTOR (sirolimus y everolimus). El monitoreo terapéutico de estas drogas está especialmente indicado, porque presentan una elevada variabilidad farmacocinética interindividual y estrechos rangos terapéuticos. En el contexto de del trasplante de órganos, el análisis de las concentraciones de inmunosupresores en circulación y su relación con el estado clínico del paciente, favorece la correcta individualización posológica en las terapias de inducción, mantenimiento y rescate. Los inhibidores de la calcineurina y de la mTOR se caracterizan por presentar una elevada afinidad por los glóbulos rojos; y por este motivo la matriz de elección para cuantificarlos es la sangre entera obtenida por punción venosa. La cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) es el método de referencia para determinar los niveles de estos fármacos en sangre. Esto se debe a su elevada sensibilidad, su alta especificidad y su capacidad para cuantificar más de un analito en una misma corrida. No obstante, con el surgimiento de esta metodología y su implementación en los laboratorios clínicos; la gota de sangre seca en papel de filtro (DBS por las siglas en inglés de dried blood spot) se transformó en una potencial matriz para realizar el monitoreo terapéutico de estas drogas, debido a la facilidad de recolección y estabilidad de las muestras. Sin embargo, los inconvenientes asociados al hematocrito del paciente limitan significativamente su aplicación. El análisis del contenido total de la mancha a través de la técnica denominada sangre seca en papel de filtro precortado (pre-cut dried blood spot o PCDBS por sus siglas en inglés), podría solucionar este problema, y transformarse en una estrategia prometedora para el análisis de rutina. Por este motivo, el objetivo principal del presente trabajo de tesis doctoral fue optimizar un método analítico para cuantificar tacrolimus, sirolimus, everolimus y ciclosporina A en PCDBS por LC-MS/MS. Para ello se desarrolló y validó una metodología utilizando un kit comercial y siguiendo las recomendaciones de distintas guías internacionales. Además mediante dos estudios de comparación de métodos, se evaluaron respectivamente, la influencia del hematocrito sobre la utilidad clínica de los resultados y el potencial uso de la sangre obtenida por punción capilar en PCDBS como matriz para realizar el monitoreo terapéutico de los cuatro fármacos. En ambos casos, se analizaron muestras apareadas provenientes de pacientes trasplantados farmacológicamente expuestos al menos a un inmunosupresor; y se estudió el sesgo metodológico tanto globalmente como en niveles de decisión médica. En el primer estudio de comparación, se sembró una alícuota de sangre obtenida por punción venosa en un disco de papel de filtro precortado y se analizó con el método validado en PCDBS; mientras que otra alícuota se cuantificó por el método de referencia en sangre entera. En el segundo estudio se siguió el mismo diseño, recolectando simultáneamente muestras de sangre entera y sangre capilar en PCDBS. Los resultados mostraron que el método fue adecuado para el propósito previsto, porque todos los parámetros de desempeño analítico cumplieron con criterios de aceptación previamente establecidos. Asimismo, se demostró que el hematocrito no tuvo influencia sobre la utilidad clínica de los resultados; ya que los valores de sesgo obtenidos en los niveles de decisión médica para cada fármaco fueron menores al requisito de calidad propuesto internacionalmente. Lo mismo ocurrió con la cuantificación de fármacos inmunosupresores en sangre obtenida por punción capilar y recolectada en PCDBS. Por este motivo, se consideró que los resultados obtenidos mediante el método de referencia y el validado en este estudio fueron clínicamente concordantes y las técnicas analíticas, intercambiables. A diferencia de otros estudios publicados en la literatura (todos ellos, en DBS), el método optimizado en el presente trabajo de tesis doctoral resultó ser más rápido y sencillo. Además, fue el primero en reportar la cuantificación de inmunosupresores utilizando PCDBS como estrategia de recolección de muestras. Asimismo, también fue el primer método en el que se adaptó un kit comercial para llevar a cabo la determinación. Las ventajas asociadas a esta metodología permitirían aplicarla a diversas situaciones, como ensayos clínicos y extracciones dificultosas en pacientes físicamente deteriorados, neonatos y niños. También permitiría que pacientes ambulatorios que residan lejos del laboratorio puedan enviar sus muestras a través de correo postal.

Palabras clave del autor: Fármacos inmunosupresores; PCDBS, LC-MS/MS; Comparación de métodos.

 Registro del documento
 Título: Cuantificación de fármacos inmunosupresores en sangre seca en papel de filtro precortado por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem
 Autor(es): Bressán, Ignacio Guillermo
 Año: 2019
 Tipo de documento: Tesis.
 Contenido: Ver Contenido
 Descriptores: Cromatografía de Gases y Espectrometría de Masas; Diana Mecanicista del Complejo 1 de la Rapamicina; Eritrocitos ; Espectrometría de Masas en Tándem ; Farmacocinética ; Inmunosupresores ; Inhibidores de la Calcineurina ; Purificación por Afinidad en Tándem ; Recolección de Muestras de Sangre ; Trasplante de Órganos ; Blood Specimen Collection; Calcineurin Inhibitors ; Erythrocytes ; Gas Chromatography-Mass Spectrometry; Immunosuppressive Agents ; Mechanistic Target of Rapamycin Complex 1 ; Organ Transplantation ; Pharmacokinetics ; Tandem Affinity Purification ; Tandem Mass Spectrometry
 Notas: La versión digital de esta tesis no está disponible en TROVARE. Puede consultar su versión impresa en la Biblioteca Central.-- Embargo por tres años, desde junio del 2019 hasta junio del 2022.
 Notas: La versión digital de esta tesis no está disponible en TROVARE. Puede consultar su versión impresa en la Biblioteca Central.-- Embargo por tres años, desde junio del 2019 hasta junio del 2022.
 Extensión: viii, 163 p.
 Licencia:
 Derechos: Bressán, Ignacio Guillermo
 Acceso: Embargo (EM)

 
    Acerca de  |  Contacto
Instituto Universitario y Hospital Italiano de Buenos Aires.
Todos los derechos reservados.